敲除细胞株构建服务
Knockout Cell Line Construction — CRISPR/Cas9
CRISPR/Cas9基因编辑技术为基因功能研究提供了革命性工具。赛瑞拓生物提供从sgRNA设计到单克隆敲除株鉴定的完整服务。
🧬 支持类型：
✅ 单基因完全敲除(KO)
✅ 双基因敲除(DKO)
✅ 条件性敲除(LoxP)
✅ 点突变/敲入(HDR)
工作流程
| 阶段 | 服务项目 | 周期 |
|---|---|---|
| Ⅰ sgRNA设计 | 针对目标基因设计3条sgRNA，避开高脱靶位点 | 1-2个工作日 |
| Ⅱ 载体构建 | sgRNA退火、连接至LentiCRISPRv2或px459，测序验证 | 3-5个工作日 |
| Ⅲ 细胞转染 | Lipofectamine/电转/慢病毒感染，GFP荧光监测效率 | 2-3个工作日 |
| Ⅳ 单克隆筛选 | 嘌呤霉素筛选+有限稀释法，96孔板单克隆扩增 | 7-14个工作日 |
| Ⅴ 敲除鉴定 | T7E1酶切+Sanger测序（峰图分析KO效率） | 3-5个工作日 |
| Ⅵ 蛋白验证 | Western Blot确认蛋白水平完全缺失 | 3-5个工作日 |
📦 交付标准：
- 目标基因敲除细胞株×2-3株（T25培养瓶或冻存管交付）
- sgRNA序列信息
- T7E1酶切鉴定图谱+Sanger测序峰图及分析报告
- Western Blot蛋白水平验证报告
- 完整实验记录
🎯 服务保障：
承诺提供至少1株蛋白水平完全敲除的细胞株。若首次未获完全敲除克隆，免费调整方案二次构建。